產(chǎn)品搜索
聯(lián)系我們
聯(lián)系人：蔣經(jīng)理
電話：4008750250
手機：18066071954
地址：南京市棲霞區(qū)緯地路9號
Email： zhangxiangwen@cobioer.com
電話：4008750250
手機：18066071954
地址：南京市棲霞區(qū)緯地路9號
Email： zhangxiangwen@cobioer.com
技術(shù)文章 / article
細胞株開發(fā)的主要過程要知道
原載自：m.linai8768.com[技術(shù)資料頻道] 2022-10-14 瀏覽次數(shù)：1971
細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)細胞中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的細胞。一般認為，細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
細胞株開發(fā)是抗體藥物CMC的起點和基礎(chǔ)，細胞株的好壞直接決定生產(chǎn)成本、工藝復(fù)雜度和產(chǎn)品質(zhì)量，開發(fā)穩(wěn)定細胞株的過程包括：
宿主細胞的選擇，表達載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染，單克隆化以及高表達細胞株的篩選。目前大部分的抗體藥物都是選用的CHO細胞，但原始CHO細胞系流轉(zhuǎn)到不同的實驗室和公司，經(jīng)過不同的培養(yǎng)、馴化、改造和重新克隆后形成了不同種類的CHO細胞系。這些不同CHO細胞系之間的形態(tài)、生長、表達、代謝，甚至基因組都有較大差異。宿主細胞的選擇除了考慮研發(fā)周期、成本以及后期整體的生產(chǎn)成本，還需要有清晰的歷史背景信息。
表達載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染開始是指將表達抗體的目的基因構(gòu)建到載體上，再將該載體轉(zhuǎn)染進入宿主細胞內(nèi)。常用于哺乳動物細胞轉(zhuǎn)染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、病毒轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，需要根據(jù)細胞類型和實驗進行選擇。理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率、低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響小，并且易于使用和具有可重復(fù)性等特點，所以在正式開展轉(zhuǎn)染實驗前還要做多項預(yù)試驗，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
篩選高表達單克隆細胞株是細胞株構(gòu)建的關(guān)鍵步驟，衡量標準包括抗體表達量、產(chǎn)品的純度、翻譯后修飾、代謝穩(wěn)定性等。常用的篩選克隆的方法包括：有限稀釋法、流式細胞儀分選法、半固體培養(yǎng)基篩選法等。
